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提高細胞培養(yǎng)效率的兩個關(guān)鍵點

更新時間:2023-09-25  |  點擊率:705

細胞體外培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用,是人類開啟生命奧秘大門的鑰匙。該項技術(shù)的發(fā)展,科學(xué)家們能夠脫離供體的情況下,在實驗室中,研究并分析各種細胞的生命活動。高效的細胞培養(yǎng)來之不易,操作過程的實際情況十分復(fù)雜,存在諸多可能會影響培養(yǎng)效率的因素,包括實驗環(huán)境、實驗材料的選擇等。

 

一、實驗環(huán)境

 

細胞培養(yǎng)環(huán)境需要嚴格無菌,甚至是空氣都要使用新風(fēng)系統(tǒng)進行過濾。對于墻壁、地板、桌面、超凈工作臺,更是要定期清潔。德國Minerva Biolabs公司的Mycoplasma-off™ WipesMycoplasma-off™直接用于實驗環(huán)境、物品、儀器、設(shè)備的清潔。該試劑無需稀釋,噴灑或擦拭后自然風(fēng)干,即可高效清除環(huán)境中的微生物污染。

 

細胞培養(yǎng)環(huán)境中,培養(yǎng)箱水槽,水浴鍋經(jīng)常會有支原體以及各種細菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時,水槽中的水源即會成為細胞污染的重要來源。保持水槽的潔凈,對細胞培養(yǎng)的順利進行非常重要。推薦:全球眾多實驗室日常都在使用德國MB公司生產(chǎn)的Water Shield™支原體污染防護劑(水槽用)。Water Shield™可持續(xù)作用四周,使水源避免受到支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。1:200的比例,加到水浴鍋或培養(yǎng)箱水盤的無菌水中即可

 

二、實驗材料的選擇

 

所培養(yǎng)的細胞,來源應(yīng)清晰,確保無污染。對于培養(yǎng)試劑及耗材,也盡可能選擇無菌的。

 

細胞離不開高品質(zhì)血清。而胎牛血清作為天然的培養(yǎng)基,在培養(yǎng)實驗中占有重要位置。選擇胎牛血清的重要指標(biāo)之一,就是考察內(nèi)毒素的含量。

內(nèi)毒素在細胞傳代增殖過程中,會直接參與細胞凋亡的過程,一定劑量下,會給細胞培養(yǎng)帶來很多問題,特別是免疫細胞和干細胞,例如:誘導(dǎo)免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。因此,血清中內(nèi)毒素含量越低,對細胞毒性越小,越利于細胞的生長和傳代;反之,內(nèi)毒素含量過高,會直接導(dǎo)致細胞狀態(tài)不良,提前老化,甚至死亡。

 

基于以上研究,用于細胞培養(yǎng)的牛血清,要通過嚴格的內(nèi)毒素水平檢測,每一批血清都有完整的檢測報告,通過內(nèi)毒素的檢測數(shù)值,對血清的品質(zhì)進行分級和評估。

 

目前國際通用的分級方法,均以內(nèi)毒素含量的高低來確定,內(nèi)毒素含量越低,血清的級別就越高,以胎牛血清為例:

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優(yōu)級胎牛血清;

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥25EU/ml時,此血清為標(biāo)準(zhǔn)級胎牛血清;

 

Ausbian®進口特級胎牛血清,澳洲血源,均經(jīng)過嚴格篩選, 目前所有批次內(nèi)毒素都低于3EU/ml,其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的內(nèi)毒素血清,更利于細胞的生長和傳代。

 


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