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CRISPR系統(tǒng)的實(shí)際應(yīng)用,PCR Clean™助力科研

更新時(shí)間:2023-09-23  |  點(diǎn)擊率:772

CRISPR是一種常見的基因編輯技術(shù)。此類操作對實(shí)驗(yàn)室中,核酸污染的控制有比較高的要求。德國MB公司生產(chǎn)的PCR Clean™,即用型核酸污染祛除噴霧,可直接噴灑在待清潔物品表面,風(fēng)干即可,便捷高效地清除DNA、RNA, 以及DNA酶、RNA酶等核酸污染。

 

CRISPR系統(tǒng)在生物學(xué)相關(guān)的許多領(lǐng)域,都有應(yīng)用。近日,發(fā)表在《Nature》上,標(biāo)題為:“CD300ld on neutrophils is required for tumour-driven immune suppression"的文章,在腫瘤小鼠模型中進(jìn)行了體內(nèi)CRISPR-Cas9篩選,并確定CD300ld是腫瘤有利受體的關(guān)鍵候選。

 

免疫檢查點(diǎn)阻斷在腫瘤治療中取得了相當(dāng)大的成功。然而,很大一部分患者對這些治療只有很小的反應(yīng),甚至沒有反應(yīng)。以骨髓細(xì)胞含量高為特征的免疫抑制腫瘤微環(huán)境(TME)是有效免疫治療的主要障礙。

 

中性粒細(xì)胞是一種數(shù)量豐富且種類繁多的髓樣細(xì)胞,提供先天防御急性感染或炎癥。在癌癥和其他病理性慢性炎癥的情況下,異常的粒細(xì)胞生成顯著增加骨髓中中性粒細(xì)胞的釋放。這些中性粒細(xì)胞在功能上受到干擾,特別是在晚期癌癥中,表現(xiàn)出高度的可塑性,并促進(jìn)了腫瘤發(fā)生的直接和間接機(jī)制。這種病理活化的中性粒細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)大的免疫抑制活性,在功能上被命名為PMN-MDSCs或粒細(xì)胞髓源性抑制細(xì)胞(g-MDSCs),在小鼠和人類腫瘤發(fā)生中成為TME的關(guān)鍵組成部分。

 

多種中性粒細(xì)胞發(fā)育狀態(tài)在腫瘤中共存。PMN-MDSCs和經(jīng)典中性粒細(xì)胞具有相同的髓系起源和表面標(biāo)記,然而,它們在功能上是不同的,并且很少有原型遺傳和表型標(biāo)記來區(qū)分它們。在腫瘤環(huán)境中,大多數(shù)中性粒細(xì)胞被證明是具有免疫抑制活性的PMN-MDSCs。PMN-MDSCs在大多數(shù)類型的癌癥中擴(kuò)增,促進(jìn)腫瘤進(jìn)展并導(dǎo)致對免疫治療的不良反應(yīng)。需要鑒定參與PMN-MDSCs募集和功能的關(guān)鍵分子,以選擇性地靶向PMN-MDSCs進(jìn)行腫瘤治療。

 

在這項(xiàng)研究中,科研人員通過表征細(xì)胞表面蛋白,確定CD300ldPMN-MDSCs中存在的關(guān)鍵免疫抑制因子,為癌癥免疫治療提供了克服TME免疫抑制的潛在靶點(diǎn)。

 

總結(jié):

科研人員通過在腫瘤小鼠模型中進(jìn)行了體內(nèi)CRISPR-Cas9篩選,確定CD300ld是腫瘤有利受體的候選。CD300ld在正常中性粒細(xì)胞中特異性表達(dá),在PMN-MDSCs中發(fā)生腫瘤后表達(dá)上調(diào)。CD300ld敲除以pmn - mdsc依賴的方式抑制多種腫瘤類型的發(fā)展。CD300ldPMN-MDSCs募集進(jìn)入腫瘤及其抑制T細(xì)胞激活功能所必需的。CD300ld通過STAT3-S100A8/A9軸起作用,敲除CD300ld逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫抑制微環(huán)境。CD300ld在人類癌癥中表達(dá)上調(diào),并與患者生存表現(xiàn)出不利的相關(guān)性。阻斷CD300ld活性可抑制腫瘤發(fā)展,并與抗pd1具有協(xié)同作用。我們的研究發(fā)現(xiàn)CD300ldPMN-MDSCs中一個(gè)關(guān)鍵的免疫抑制因子,是腫瘤免疫抵抗所必需的,并為癌癥免疫治療提供了一個(gè)潛在的靶點(diǎn)。

 

 


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