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德國MB熒光定量PCR法(qPCR)檢測試劑盒介紹

更新時間:2023-05-05  |  點擊率:519

熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應的實時監(jiān)測,簡稱qPCR。

優(yōu)點:①靈敏度高、特異性強。

②時間短,2-3小時出結果。

③檢測結果可定量。

④操作簡便。

缺點:①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會出現(xiàn)假陽性。(可用培養(yǎng)法做補充驗證)

②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大(由于引物及內在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導下使用。

支原體熒光定量PCR檢測試劑盒(qPCR經典法)(符合歐洲藥典)-熒光定量PCR檢測-北京締一生物科技有限公司


  • 特點

  • 1. 內控對照為獨立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

  • 2. 高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種(包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體)。與細菌和真核DNA無交叉反應。

  • 3. 高靈敏度,檢測限可達到≤10CFU/ml。

  • 4. 有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

  • 5.有相應配套的支原體定量標準品,便于后定量檢測。 操作步驟

  • 第1步:樣本處理 a.細胞培養(yǎng)上清

  • b. 生物藥或需遵循藥典的樣本 說明:①樣品基質可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。 ②細胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶,在低溫下也能降解支原DNA,影響檢測靈敏度。 建議:樣本做DNA抽提處理,實現(xiàn)較高靈敏度。 推薦:德國MB公司生產的支原體DNA提取試劑盒 Venor® Gem Sample Preparation Kit 該DNA抽提試劑盒已經過廣泛驗證。 第2步:試劑制備 a. 凍干粉溶解

  • b. 反應體系制備 b1) 樣品為細胞上清篩查——反應體系制備

  • b2) 樣品為生物藥——反應體系制備

  • 第3步:啟動熒光定量PCR儀

  • 第4步:結果判別 FAM通道:檢測支原體熒光信號。HEX通道:檢測內控對照熒光信號。 支原體DNA和內控DNA存在信號的競爭性抑制。 支原體DNA越多,F(xiàn)AM通道信號越高,檢測內控對照的HEX通道信號越低。 定量需基于Ct值和DNA標準曲線。 Ct<40為陽性結果。Ct≥40為陰性結果。



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