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一些常見的限定化學(xué)成分培養(yǎng)基操作介紹

更新時間:2020-11-10  |  點擊率:848
   限定化學(xué)成分培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基中的素有成分都是明確的,它同樣不含有動物蛋白,化學(xué)限定培養(yǎng)基同樣也不是添加了植物水解物,而是使用了一些已知結(jié)構(gòu)與功能的小分子化合物,如短肽、植物激素等.這種培養(yǎng)基更有利于分析細(xì)胞的分泌產(chǎn)物.目前已經(jīng)有適合于293細(xì)胞、CHO細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞生長的CDM問世。
  一、常規(guī)培養(yǎng)和傳代
  1)在聚碳酸酯Erlenmeyer搖瓶中預(yù)平衡足量化學(xué)限定培養(yǎng)基1小時。
  2)確定活細(xì)胞密度。
  3)調(diào)整搖瓶工作體積(見英文說明書表2)。
  4)接種細(xì)胞密度為3×105細(xì)胞/ml
  5)5%CO2,37℃培養(yǎng)。
  6)細(xì)胞密度達(dá)到15-40×105細(xì)胞/ml時,進(jìn)行傳代。通常間隔為3-4天。
  7)如果細(xì)胞密度太低,或細(xì)胞在適應(yīng)期不生長,則在4天后進(jìn)行離心,更換培養(yǎng)基。
  對某些細(xì)胞系,無須預(yù)平衡,而2-8℃的培養(yǎng)液效果更好。
  二、從血清到無血清培養(yǎng)的過渡
  1.離心足量細(xì)胞,細(xì)胞懸液密度為4-6×105細(xì)胞/mL,115×g,5分鐘
  2.細(xì)胞在含2%胎牛血清的培養(yǎng)基中重懸培養(yǎng)(必要時含6-8mM谷氨酰胺)。
  3.細(xì)胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
  4.在傳代至少3次后降低血清濃度為0.5%。
  5.細(xì)胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
  6.在2-4代后血清濃度降為0%
  7.繼續(xù)培養(yǎng)直到細(xì)胞存活率>90%
  8.適應(yīng)后的細(xì)胞應(yīng)在化學(xué)限定培養(yǎng)基中以2-5×105細(xì)胞/ml接種。培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)在每3-4天稀釋一次。由于HEK細(xì)胞容易積聚,培養(yǎng)物應(yīng)攪動或搖晃,采用轉(zhuǎn)瓶或搖瓶系統(tǒng)。
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